EdU细胞增殖分析试剂采用click化学技术,可为新合成的DNA检测与定量提供比传统BrdU方法更的替代物。当在DNA合成过程中掺入修饰的核苷EdU(5-乙炔基-2-脱氧尿苷)时,可以通过快速的“click化学”反应检测到它,并且对细胞的破坏作用小。点击化学相比于BrdU具有更简便、更快速、更易操作的优点。与使用溴脱氧尿苷(BrdU)检测法不同,Click-iTEdU检测法不是基于抗体,因此并不需要DNA变性以检测掺入的核苷。此外,Click-iTEdU可以与R-PE、R-PEtandems和GFP等荧光蛋白复用提高效力。当您平行比较这些方法时,Click-iTEdU和InvitrogenClick-iTPlusEdU在测定细胞增殖方面的优势是显而易见的。EdU细胞增殖检测试剂盒运用再哪些领域?湖南口碑好的EdU细胞增殖检测试剂盒
EdU上的乙炔基能与生物素标记的叠氮化物(Biotinlabeledazide)通过一价铜离子的催化发生共价反应,形成稳定的三唑环,该反应非常迅速,被称作点击反应(Clickreaction),其反应原理参见图1。通过点击反应,新合成的DNA会被相应的生物素探针所标记,从而可以使用适当的检测设备检测到增殖的细胞。EdU检测法中的点击反应(Clickreaction)原理图。生物素或荧光探针等标记的叠氮化物(LabeledAzide)与掺入到细胞DNA中的EdU,在铜离子的催化发生共价反应,形成稳定的三唑环,终使细胞DNA标记上生物素等探针。湖南口碑好的EdU细胞增殖检测试剂盒EdU细胞增殖检测试剂盒多少钱?
羟基脲(Hydroxyurea)为DNA合成抑制剂,经过10mM羟基脲提0min处理的细胞,绿色荧光阳性的细胞几乎完全消失,因此常被用作EdU实验的阴性对照。配制好的Click-iTAdditiveSolution请根据每次用量适当分装后-20℃保存,避免反复冻融。Click-iTAdditiveSolution融化后有白色物质析出为正常现象,请上下颠倒几次,待全部溶解后使用。溶液一旦呈现棕色,则说明有效成分降解,不能再使用。皂苷促渗液可以用于全血及含红细胞的细胞悬液,以及其他含多种细胞类型的混合细胞悬液的通透。这种促渗液可以在裂解红细胞的同时,维持白细胞的光散射特性。本试剂盒做动物实验时可能需要更多的EdU,请根据实验需求用合适稀释液稀释后使用。
试剂盒以外自备试剂和仪器:●PBS●纯水●1%乙酸●移液器及吸头●有515nm波长的酶标仪使用方法:使用注意事项:●接种时注意细胞悬液一定要混匀,以避免细胞沉淀下来,导致每孔中的细胞数量不等,可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发,为了减少误差,建议培养板的四边每孔只加培养基,而不作为指标检测孔。●培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。●用水或乙酸洗细胞时充满孔后保持一会倒掉即可,也可以用排或洗板机。●OD值在1-2之间较好。以96孔板为例:1.取出培养好待测的96孔板。2.在培养基表面小心加入50μl固定液(悬浮细胞加100μl固定液),静置5分钟后放入4℃冰箱30分钟-1小时。(贴壁细胞可弃培养基后加入用水3倍稀释的固定液;悬浮细胞必须直接加入固定液,轻加在培养液面,静置5分钟后再将平板移至4℃放置1小时,可使悬浮细胞固定在培养孔底部)。EdU细胞增殖检测试剂盒在社会上的重要性。
EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子,通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比,EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)即可有效检测,可有效避免样品损伤,在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象EdU细胞增殖检测试剂盒厂家。湖南口碑好的EdU细胞增殖检测试剂盒
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该产品是采用成像检测方法对贴壁细胞进行检测,适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜等仪器。非贴壁细胞可在孵育EdU后进行细胞涂片处理,固定后再采用贴壁细胞的染色流程进行检测。也可以应用于流式细胞仪检测。建议染色完成后立即进行荧光显微镜拍照观察;如果条件限制,请于4°C条件下避光湿润保存3天之内完成拍照。若为细胞爬片或涂片,可使用抗荧光淬灭封片剂进行封片后于4°C条件下保存及拍照检测。而EdU检测方法不需要剧烈的DNA变性,只需温和的细胞固定化和透化处理,能够较好地保护细胞形态、DNA整体结构及细胞内抗原识别位点,操作步骤更加快速、灵敏和准确湖南口碑好的EdU细胞增殖检测试剂盒